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細胞破碎的原理與技術

更新時間:2020-12-25      點擊次數:3092
 高壓均質機是由一個高壓柱塞泵及特殊結構的均質閥組成,需處理的物料在柱塞所造成的高壓條件下進入可調節壓力大小的閥組中,失壓后的物料從可調節限流縫隙中以*的流速(1000米/秒,可達1500米/秒)噴出,撞在閥組件之一的沖擊環上 保持細胞活性的重要參數是溫度和時間,物料在高壓均質閥內部的約0.01秒的瞬間,在高壓的作用下溫度會上升到大約10~15℃。
通過均質閥后在經過高效換熱器的作用下,溫度在2~3秒作用會迅速下降,所以物料在溫度相對較高的條件下僅僅維持多3秒鐘。 滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock) 滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內水分便向外滲出,細胞發生收縮,當達到平衡后,將介質快速稀釋,或將細胞轉入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內,引起細胞快速膨脹而破裂。 凍融破碎法(freezing and thawing) 將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反覆多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內水結晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。 酶溶破碎法(enzyme lysis) 酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或*破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陽性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陰性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶。 化學破碎法(chemical treatment) 采用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑 去垢劑破碎法(detergents)
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